酶解后?nanodrop对肽段定量，取1μg肽段溶液上机检测。
高pH反相?谱根据肽段的理化性质不同，通过调节流动相的极性来完成对复杂多肽样本的分离。将?个样本分离成多个馏分，分别上机检测，能够有效的提?鉴定深度，提?鉴定蛋?鉴定数量。
看SDS-PAGE电泳图条带丰富，分布基本均匀，清晰，蛋??量充足。同组生物重复样本，条带基本?致，没有降解，如果有高丰度条带，需要进?特殊处理。
实验?法原因：电泳压力太大；缓冲液配制时间过?；上样前样品加热不充分；
样本原因：样本盐浓度太?；样本上样量太?；样本溶解不完全；样本有降解。
①样本收集过程中处理不当，如样本收集操作时间较长，没有在冰上操作。蛋?酶处于活性状态，未加?变性剂或蛋?酶抑制剂。
②引入了较多杂质，如发酵液引入；植物根叶清洗后没有吸收多余的水分，处理过程温度较?等。
③样本反复冻融。
部分样本（?的?液）可以通过去除?丰富蛋?的试剂盒Proteominer去除，通过标准SDS-PAGE验证去除效果；还可以通过跑胶检测，切除?丰度条带。但可能会滤掉部分的低丰度蛋?。我们公司?般采?与样本相对应的试剂盒来去除?丰度蛋白。
含有?丰度蛋?样本：血液（?蛋?）、唾液（淀粉酶）、脑脊髓液（白蛋?）、卵泡液（?蛋?）、肌肉组织（肌蛋?）等通常情况下，由于质谱shotgun采集原理，?丰度蛋?会影响低丰度蛋白的检出，导致最终鉴定出来的蛋?数?（尤其是低丰度蛋白）偏少。?般情况为了还原样本的原始情况，我们不建议去除高丰度 ，而是选择非标定量?法进行分馏分上机。
